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应用荧光素酶报告基因进行I型干扰素的生物学活性检测

阅 8260次 / 原平皓生物
关键词: 发光法检测, 荧光素酶报告基因, Mx蛋白, Mx启动子, 干扰素

简介：

        干扰素（Interferon，IFN）是重要的抗病毒活性物质，是机体非特异免疫系统的重要组成部分，在动物和人类抗感染和肿瘤临床治疗上有着广泛的应用。但长期以来一直缺乏理想的INF活性标准定量检测方法。
        以往常用的IFN活性定量方法包括：
  1. 抗病毒活性检测法（Antiviral assavs，AVA）：AVA的敏感度和准确性较低，并具有一定的生物安全危险；
  2. ELISA方法：其方法简单，但是只能检测IFN的抗原性，一些无生物学活性的类IFN蛋白会影响检测结果，并且不同的IFN需要不同的单抗；
  3. 其他基于IFN抑制细胞增殖、调节细胞功能活性等特性的检测方法：具有局限性，或方法繁琐。
        I 型IFN抗病毒的主要途径是经由JAK-STAT信号转导通路激活Mx启动子（Mx promoter，Mxp），其表达的Mx蛋白（Mx protein）能够抑制负链RNA病毒复制。因此构建包含荧光素酶报告基因的Mx启动子载体，即可通过检测荧光素酶报告基因来检测I型干扰素的活性。

原理：

检测方法：

  1. 构建包含Mx启动子和荧光素酶报告基因的载体；
  2. 转染细胞并培养；
  3. 加入IFN处理细胞；
  4. 检测荧光素酶活性。

参考文献：

  1. 陈伟业，葛金英，肇慧君等。基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡I型干扰素生物学活性的研究。畜牧兽医学报，2008,39（1），123-128

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