细胞色素P450（CYP450）发光检测
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原平皓生物
关键词: 发光检测, Luciferase, CYP450, 细胞色素P450
简介：
细胞色素P450（cytochromeP450，简称CYP450）为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。该酶系是重要的药物非靶点的功能蛋白质，参与药物代谢的*重要的I相酶，催化了90％以上的药物、毒素以及致癌剂等在人体内的代谢转化和清除。
将P450的酶促反应与荧光素酶发光反应相偶联，可以通过检测发光的方式来检测P450的活性。
将P450的酶促反应与荧光素酶发光反应相偶联，可以通过检测发光的方式来检测P450的活性。
原理：
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检测方法：
1. 试剂准备
a) 按照说明书，配制4×CYP反应液
b) 按照说明书，配制2×NADPH
c) 按照说明书，配制荧光素酶检测液
2. 样品准备
a) 每孔12.5ul的待测样品，体积不够时，使用纯水稀释到12.5ul
3. 发光检测
a) 每孔中加入12.5ul的待测样品
b) 然后加入12.5ul的4×CYP反应液，在37℃下孵育10min
c) 然后加入25ul的2×NADPH启动CYP反应
d) 室温下继续孵育10-40min
e) *后加入50ul荧光素酶检测液，使用发光检测仪检测发光
a) 按照说明书，配制4×CYP反应液
b) 按照说明书，配制2×NADPH
c) 按照说明书，配制荧光素酶检测液
2. 样品准备
a) 每孔12.5ul的待测样品，体积不够时，使用纯水稀释到12.5ul
3. 发光检测
a) 每孔中加入12.5ul的待测样品
b) 然后加入12.5ul的4×CYP反应液，在37℃下孵育10min
c) 然后加入25ul的2×NADPH启动CYP反应
d) 室温下继续孵育10-40min
e) *后加入50ul荧光素酶检测液，使用发光检测仪检测发光
参考文献：
- Cali, J.S. et al. (2006) Luminogenic cytochrome P450 assays. Expert. Opin. Drug. Metab. Toxicol. 2, 629–45.
- Stevens, J.C. (2006) New perspectives on the impact of cytochrome P450 3A expression for pediatric pharmacology. Drug Discov. Today 11, 440–5.
*如果您在实验中遇到任何问题, 请与我们的技术人员沟通, 我们将提供帮助.
联系电话: 010-5158 2336转803 电子邮箱: help
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