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Gaussia分泌型荧光素酶报告基因发光检测

阅 9555次 / 原平皓生物
关键词: SEAP, 发光检测, 腔肠素, 报告基因, 荧光素酶, 分泌型, 分泌性, Gaussia

简介：

        Gaussia luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类动物的新型荧光素酶。通过报告基因载体，Gaussia luciferase可用于哺乳动物细胞表达。表达后的Gaussia luciferase为单条肽链的单体酶，其分子较小（185aa），且具有分泌性信号肽，因此可通过内质网分泌到细胞外。该荧光素梅催化底物腔肠素的氧化反应并且发光（480nm），该反应无需ATP参与。

与其他荧光素梅相比，使用Gaussia luciferase作为报告基因有更多的优势：
  1. 分泌型荧光素酶，可直接取上清检测，无须裂解细胞
  2. 发光强度高，是其它荧光素酶的1千倍
  3. 反应无须ATP，不受ATP影响
  4. 稳定性高，对温度、PH值等耐受性强

原理：

检测方法：

  1.  试剂准备：将底物与Buffer混合，形成Gaussia检测液，使用前平衡到室温
  2.  样品准备：直接取20ul细胞培养上清，或使用裂解液裂解细胞后取20ul细胞裂解液
  3.  检测：20ul样品与50ulGaussia检测液混合，放入发光检测仪检测发光值

参考文献：

  1. Tannous BA, Kim DE, Fernandez JL, Weissleder R and Breakefield XO. (2005) Codon-optimized Gaussia luciferase cDNA for mammalian gene expression in culture and in vivo. Mol. Ther. 11: pp.435–443.
  2. Cheng G, Davis RE. An improved and secreted luciferase reporter for schistosomes. Mol Biochem Parasitol, 2007,155(2): 167−171.

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