双荧光素酶报告基因检测试剂盒
| 品 名: | 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 | ||||||||||
| 货 号: | GN201-01 | ||||||||||
| 所属类别: | 荧光素酶相关 > 荧光素酶相关 | ||||||||||
| 供应商: | YPH | ||||||||||
| 说明书: | 下 载 | ||||||||||
| 规格/货号: |
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| 适用范围: | 适用于萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶共转染哺乳动物细胞的双荧光素酶报告基因检测。 | ||||||||||
储存：未打开包装前避光储存于-20℃，打开包装后根据产品说明书上的单个组分的储存条件保存。避免反复冻融。 v 产品介绍： 采用生物发光（bioluminescent）法对报告基因进行检测是最常用的有效手段。荧光素酶（luciferase）能催化底物荧光素（luciferin）的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Ranilla luciferase）催化的发光反应，具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围（7~8个数量级的线性范围），酶的检测灵敏度达10-14~10-20 mol，但两者催化的化学反应底物和最适反应条件完全不同。利用这一特性，将这两种荧光素酶配合，即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中Ranilla luciferase通常作为内参照。 双荧光素酶报告基因检测试剂盒可在单个样品中依次检测萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，为双荧光素酶报告基因的检测提供了有效的手段。试剂盒中的Cell Lysis Buffer适合于两种荧光素酶活性的保持，且兼容于其他类型的报告基因和蛋白定量检测试剂。优化的酶反应体系，使每种酶的荧光半衰期超过15min，以便同时操作多个样品，并保证萤火虫荧光素酶的发光及时淬灭，也不影响随后的海肾荧光素酶的检测。 v 适用范围： 适用于萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶共转染哺乳动物细胞的双荧光素酶报告基因检测。 v 产品特点： 1． 简单：试剂易于配制、保存，样品检测操作简单。 2． 快速：5-10分钟内完成样品裂解，几秒内完成双荧光素酶检测。 3． 灵敏度高：两种荧光素酶的检测灵敏度达10-14~10-20 mol。 4． 稳定：萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶发光值稳定可靠。 5． 准确性高：使用海肾荧光素酶作为内对照可以减少细胞数量、生长状态、转染效率及非特异性细胞反应等因素的影响，得到更精确的结果。 v 操作步骤： 1. 试剂准备： （1）稀释Cell Lysis Buffer（CLB）：用无菌水将5×Cell Lysis Buffer 进行5倍稀释，配制成1倍的CLB使用。CLB -20℃保存，使用前需新鲜配制。 （2） 配制Luciferase Assay Reagent：将Luciferase Dilution Buffer和50×Luciferase Assay Reagent室温融化，用Luciferase Dilution Buffer将50Luciferase Assay Reagent进行50倍稀释，稀释好的Luciferase Assay Reagent分装后20℃保存，避免反复冻融。测定前取出室温融化使用。 （3）配制Stop Reagent：将Stop Buffer室温融化后，按照每个样品100ul的体系，根据样品数量50倍稀释Stop Reagent 50×。Stop Reagent需使用前新鲜配制，不可长期保存或反复冻融。stop buffer融化之后，会有白色沉淀出现，将其平衡至室温后充分混匀，白色沉淀会消失。 2. 细胞裂解： （1）洗涤细胞：吸除细胞培养基，用足量的PBS轻轻洗涤细胞两次，尽量去除洗涤液。 （2）加入配制好的细胞裂解液CLB：按照如下的用量加入CLB，用移液器轻轻吹打几次，促进细胞充分裂解，室温放置5-10分钟后用来检测，如果直接将细胞培养板放置在振荡器上比较温和的裂解，可适当延长裂解时间至20分钟。
（3）样品裂解后如果不立即进行检测，应-20℃保存，长期保存需-80℃。 3. 萤火虫荧光素酶活性测定： 4. 海肾荧光素酶活性测定： 取100ul 稀释好的Stop Reagent加入步骤3的测定管中，轻轻混匀后，放入仪器进行检测。Stop Reagent能够立即终止萤火虫荧光素酶发光，并且同时启动海肾荧光素酶发光反应。如果步骤3中采用50ul检测试剂加入10ul待测样品的体系，则Stop Reagent加入50ul。 |
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