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单荧光素酶报告基因检测试剂盒

供应商：YPH       已阅: 7764 次
品 名: 单荧光素酶报告基因检测试剂盒
货 号: GN203-01
所属类别: 荧光素酶相关 >  荧光素酶相关
供应商: YPH
说明书: 下 载
规格/货号:
100 rxnGN203-01
500 rxnGN203-02
适用范围: 能够检测多种哺乳动物细胞中表达的萤火虫荧光素酶报告基因，适用于高通量筛选

 储存：未打开包装前避光储存于-20℃，打开包装后根据产品说明书上的单个组分的储存条件保存。避免反复冻融。

v  产品介绍：

真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。荧光素酶能催化底物荧光素的转化，并发射出光子。该产品为萤火虫荧光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低10-20 mol的荧光素酶，在10-14至10-20 mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。Luciferase Assay Reagent采用优化的酶反应体系，产生的荧光半衰期超过15分钟。试剂容易配制，操作方便，适用于高通量萤火虫荧光素酶活性检测。

v  适用范围：

能够检测多种哺乳动物细胞中表达的萤火虫荧光素酶报告基因，适用于高通量筛选。

v  产品特点：

1.        快速：细胞裂解在5-10分钟内完成。

2.        方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

3.        灵敏：能够检测最低10-20 mol的荧光素酶。

4.        线性范围：在10-14至10-20 mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。

 

v  操作步骤：

1. 试剂准备：

（1）稀释Cell Lysis Buffer（CLB）：根据细胞量和样品数量，按照预计使用量用无菌水将5×Cell Lysis Buffer 进行5倍稀释，配制成1倍的CLB使用。CLB -20℃保存，使用前需新鲜配制。CLB的用量参见下表：

细胞培养板

96孔板

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

CLB用量

50μl

80μl

150μl

250μl

500μl

 

 

 

 

 

（2） 配制Luciferase Assay Reagent：将Luciferase Dilution Buffer和50×Luciferase Assay Reagent室温溶化，用Luciferase Dilution Buffer将50×Luciferase Assay Reagent进行50倍稀释，稀释好的Luciferase Assay Reagent分装后20℃保存，避免反复冻融。测定前取出室温溶化使用。

注意：细胞裂解产物和Luciferase Assay Reagent平衡至室温后使用。

2. 细胞裂解：   

（1）洗涤细胞：吸除细胞培养基，用足量的PBS轻轻洗涤细胞两次，尽量去除洗涤液。

（2）加入配制好的细胞裂解液CLB：参考说明书用量加入CLB，用移液器轻轻吹打几次，促进细胞充分裂解，室温放置5-10分钟后用来检测，如果直接将细胞培养板放置在振荡器上比较温和的裂解，可适当延长裂解时间至20分钟。

（3）样品裂解后如果不立即进行检测，应-20℃保存，长期保存需-80℃。

3. 样品测定：
（1）单管型发光仪检测：取100ul Luciferase Assay Reagent加入测定管底部，加入20ul待测样品，轻轻混匀后，放入仪器进行检测，记录发光单位RLU。也可以取50ul Luciferase Assay Reagent加入10ul待测样品进行检测，但每个样品的检测体系需要一致。

（2）微孔板型发光仪检测：吸取20ul待测样品加入微孔板底部，分别加入100ul Luciferase Assay Reagent，轻轻震荡微孔板混匀，放入仪器进行检测，记录发光单位RLU。也可以取50ul Luciferase Assay Reagent加入10ul待测样品进行检测，但每个样品的检测体系需要一致。
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